凝膠過濾填料種類有很多,如瓊脂糖、葡聚糖凝膠、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、浮石、瓊脂等。層析用凝膠都是三維空間的網(wǎng)狀高聚物,有一定的孔徑和交聯(lián)度。它們不溶于水,但在水中有較大的膨脹度,具有良好的分子篩功能。它們可分離的分子大小的范圍廣,相對分子質(zhì)量在102~108范圍之間。在柱層析分離中常用的凝膠有以下幾類::
1、交聯(lián)葡聚糖凝膠
交聯(lián)葡聚糖凝膠的商品名稱為Sephadex,由葡聚糖和3-氯-1.2-環(huán)氧丙烷(交聯(lián)劑)以醚鍵相互交聯(lián)而形成具有三維空間多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。交聯(lián)葡聚糖凝膠,按其交聯(lián)度大小分成8種型號如表3所示。交聯(lián)度越大,網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越緊密,孔徑越小,吸水膨脹就愈小,故只能分離相對分子質(zhì)量較小的物質(zhì);而交聯(lián)度越小,孔徑就越大,吸水膨脹大,則可分離相對分子質(zhì)量較大的物質(zhì)。各種型號是以其吸水量(每g干膠所吸收的水的質(zhì)量)的10倍命名,如,Sephadex G–25表示該凝膠的吸水量為每g干膠能吸2.5克水。在SephadexG–25及G–50中分別引入羥丙基基團(tuán),即可構(gòu)成LH型烷基化葡聚糖凝膠。
2、瓊脂糖凝膠
瓊脂糖的商品名稱有Sepharose(瑞典)、Bio-gelA(美國)、Segavac(英國)、Gelarose(丹麥)等多種,因生產(chǎn)廠家不同名稱各異。瓊脂糖是由D-半乳糖和3,6位脫水的L-半乳糖連接構(gòu)成的多糖鏈,在溫度10O℃時呈液態(tài),當(dāng)下降至45℃以下時,它們之間相互連接成線性雙鏈單環(huán)的瓊脂糖;再凝聚即呈瓊脂糖凝膠。商品除Segavac外,都制備成珠狀瓊脂糖凝膠。瓊脂糖凝膠按其濃度不同,分為Sepharose 2B(濃度為2%)、4B(濃度為4%)及6B(濃度為6%)。Sepharose與1,3-二溴異丙醇在強(qiáng)堿條件下反應(yīng),即生成CL型交聯(lián)瓊脂糖,其熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性均有所提高,可在廣泛pH溶液(pH3~14)中使用。通常的Sepharose只能在pH4.5~9.0范圍內(nèi)使用。瓊脂糖凝膠在干燥狀態(tài)下保存易破裂,故一般均存放在含防腐劑的水溶液中。